續接上篇

GA和突（tū）變係的背景特征

GA品係數量的激增加（jiā）劇（jù）了實驗齧齒（chǐ）類動（dòng）物中未定（dìng）義的“混合背（bèi）景”問題。這對於那些需要用兩（liǎng）個（gè）獨立品係通過雜交子代開展的誘（yòu）導（dǎo）性（xìng）和條件性GA模型可能要給與更高的關注，例如Cre小鼠與Floxp小鼠的（de）雜交。

需特別關注GA品係背景的原因是即（jí）使擁有（yǒu）相同的突變基因，但（dàn）如果（guǒ）動物遺傳背景不同，也可能表（biǎo）現出不同的表型。最早報道的案（àn）例（lì）之一是經典的糖尿病基因位點(Leprdb)突變，它（tā）在C57BL/6背景（jǐng）下（xià）會（huì）出現短暫（zàn）的高血（xuè）糖症，但在C57BLKS背景下卻出現明顯的糖尿病症狀。其他例子包括動物遺傳背景會（huì）對Egfr(表（biǎo）皮生（shēng）長因子受體)敲除（chú）小鼠生（shēng）存率造（zào）成影（yǐng）響，以及對Pten敲除小鼠的（de）腫瘤發病率（lǜ）造（zào）成影響等。因此，每個GA品係都應該對其遺傳背景進行確（què）認，了（le）解其在現有的（de）遺傳背景下是否會對預（yù）期表型有（yǒu）影響，從而選擇更合適的遺傳背景及對照動物。

對（duì）均勻分布，覆蓋（gài）全基因組的遺傳標記進行掃（sǎo）描，可以用於評估來自不同近交係的（de）基因（yīn）的比例，典型的遺（yí）傳背景界定主要用於區分有可能混合的近交係背景。目前大部（bù）分應用（yòng）的場景是去區分C57BL/6和（hé）129的亞係，因為（wéi）在構建（jiàn）基因敲除/敲入小鼠時，大量應用（yòng）的（de）是129來（lái）源的ES細（xì）胞（bāo），而幹細胞注射用的囊胚供體通常會利（lì）用野生型的C57BL/6小鼠，因（yīn）此（cǐ）如果（guǒ）在後續（xù）繁（fán）育中沒有進行回（huí）交，通常會得到B6;129混合（hé）遺傳背景的後代。混合遺（yí）傳背景的問題可以通過以（yǐ）下方法避免：

（a）將轉（zhuǎn）基因或核酸酶（Cas9-sgRNA）注入選定背景（jǐng）的近交係胚（pēi）胎。

（b）在選定（dìng）背景品係（xì）來源的ES細胞中修改感興趣的基因。

（c）將嵌合體（tǐ）與用於構建（jiàn）的ES細胞來源背景相同的小鼠品係進行雜交。

對於現有的GA品係，有必要去確認其遺傳背景，如果需要在單一背景上建立品（pǐn）係，則需通過回交或（huò）是在遺傳（chuán）標記輔助下回交的方式進行（háng）。定期用背（bèi）景品係進行回交也（yě）能最大限度地使遺傳背景（jǐng）保存一致。

遺傳（chuán）穩定和冷凍保存方案

對於近交（jiāo）係、染色體置換係和同源係，育種方法和（hé）遺傳穩定（dìng）計劃有助於最大限度地減少由於遺傳漂變造成的亞係分化，也有助於防止與其他品（pǐn）係意外雜（zá）交造成的遺（yí）傳汙染。為了減少遺傳漂變，應盡量減少內部育種（zhǒng）的傳代次數，並將品係委托給專（zhuān）業機構通（tōng）過冷凍胚胎和/或精（jīng）子保存，國（guó）外如JAX、EMMA、MMRRC、IMSR、RIKEN，國內如國家遺傳工程小鼠資源庫等。同時應按照（zhào）傑克遜實驗室遺傳穩定計劃(GSP)的建議，每10代更換一次繁殖種群，以減緩（huǎn）遺傳漂變的積（jī）累。對於遠交係，應盡（jìn）量減少近親繁殖，保持雜合度（dù），同時也要管理（lǐ）遺傳漂變，否則會導致品係分化。 理想情況下，遠交係的種群（qún）應該保持至少25個繁（fán）殖對，每代近交係數都應控（kòng）製在1%以下。

胚胎（tāi）和配子的冷凍保存策略已被多（duō）個儲存庫采用，包括歐洲小鼠突變資源庫（EMMA/INFRAF RONTIER)、基因敲除小鼠計劃(KOMP)、傑（jié）克遜實（shí）驗室、動物資源與發展中心(CARD) 和RIKEN生物資源（yuán）中心（xīn）。它們可（kě）以向實驗室提供（gòng）冷凍保存的材料或活體小鼠。這些儲存庫（kù）有助（zhù）於向全世界的科學界提供（gòng）已經建立的品係，並為可能丟失的品係提供備份（fèn）。國際小鼠品係數據庫(IMSR)是一個可（kě）在線搜索的數據庫，集成了世界範圍內的小鼠品係、庫存（cún）和突（tū）變ES細胞係（xì），包含近交係、突變係和基因工程（chéng）小鼠。

參考文獻：

[1] Benavides F , T Rülicke,  Prins J B , et al. Genetic quality assurance and genetic monitoring of laboratory mice and rats: FELASA Working Group Report:[J]. Laboratory Animals, 2020, 54(2):135-148.