摘要

小鼠（shǔ）屍檢的主要目的是通（tōng）過肉眼觀察確定基因工程小（xiǎo）鼠或（huò）患病小鼠的（de）解剖特征，並描述導致（zhì）發病率和死亡率的病變。為後續檢查采（cǎi）集的組織需要適當處理和保存，以防止變質。

因此，高效的常規操作對於促進組織學和確保（bǎo）高質量的樣本至關重要。此外，優（yōu）化技術最大限度地減少了損壞（huài）樣本的數據（jù）丟失，減少了使用的動物（wù）數（shù）量，並支持（chí）3Rs“reduction”原則。

在本文中，我們提供了一種用於小鼠組織（zhī）采集的優化方法，也包括（kuò）培訓技巧和注意事項。

前言

小（xiǎo）鼠屍檢是一（yī）種以係統方式進行的死後科學檢查，能夠觀察大體解剖並采集組織，作為實驗終止研究或（huò）動物健康篩查的一部（bù）分。小鼠屍檢在技術上具有（yǒu）挑戰性，各組操作人（rén）員之間的技術差異可能影（yǐng）響數據的可比性。

因此，製定一（yī）個標準化（huà）的方（fāng）案和密切（qiē）監測人員培訓非常重要，以保持操作一致性和采（cǎi）集的組織質量。簡單的術語表有助於確保操（cāo）作者之間的描述的一致性。

本文中的方（fāng）法平均（jun1）需要2個小時（shí）左右就可以掌握，如果熟練操作，10分鍾左右就能夠完成1隻小（xiǎo）鼠的解剖操作。在操作組織或化學試劑時，需要佩戴適宜的PPEs(防護眼鏡、手套、白（bái）大褂（guà）和口罩等)。

注意：在解剖實（shí）驗動物前，必（bì）須進行培訓以掌握解剖技巧。

解剖前準備

本（běn）文所描述的解剖操作（zuò）是在兩隻16周（zhōu）齡的B6J小鼠（雌雄（xióng）各1隻（zhī））上進行的（de）。其飼養條（tiáo）件為：IVC飼養，自由采食飼料和飲水，符（fú）合動物福利。

如果需要生化檢測以補充大體觀察，在解剖前（qián）可進行終（zhōng）末采血(全身麻醉後進行)。一旦采集了所有（yǒu）必要的樣本，必須對小鼠進行放血或使用其他（tā）安樂死方法。采血（xuè）操作（zuò）人員必須（xū）經過培訓。

采集後的組織置於10%中性緩衝福爾馬林溶液中(10% neutral buffered formalin下文簡稱：10% NBF)，除非有其他（tā）要求。一些組織可以放置在無纖維吸墨紙上，以避免折疊，並便於在（zài）包埋和顯微分析時定位（wèi）。

提示:10% NBF需要預先準備好，對大多數組織具有（yǒu）良好的（de）固定效果，理想的固定液與組織的比例至少為20:1。固定液體積不足會導（dǎo）致固定效果不良。

小鼠解剖具體步驟

對小鼠實施安樂（lè）死。在確認小鼠死亡後(即血液循環停止)，在解（jiě）剖前應用70%的酒精浸濕毛皮，以（yǐ）降低過敏原風險（xiǎn）。

穿過腹側皮膚（fū）和腹肌，穿過胸腔的尾緣（yuán），在劍骨下方(圖1-A和1-B)，做（zuò）一個腹部切口。

然後從兩側向恥（chǐ）骨方向切開腹部，然後穿過尾腹，切除整個腹側皮膚。切下的腹部皮膚部分平鋪在一張紙上(圖1-C)。

√提示：確保切除的腹部皮膚部分（fèn）足夠（gòu）寬，並（bìng）包含乳腺組織（zhī）。

使用26G 3/8針頭和5ml注射（shè）器吸取10% NBF對（duì）腸道和胃部組織進行灌（guàn）注(圖1-D)，以減少自溶，因為小（xiǎo）鼠死亡後腸內迅速發生自溶。

√注（zhù）意：灌注要（yào）適量，否則腸道過度膨脹可（kě）能導致（zhì）破裂或過度拉伸。

然後摘下胃腸道。輕輕按（àn）住胃，剪斷食（shí）道，剝離腸道。剪斷骨盆附近的結腸，盡可能完整的取下（xià）整個胃腸道。

√提示：抬高小鼠軀體可以使胃（wèi）腸（cháng）道遠離腹腔，減少剪斷結腸時損傷其他（tā）組織的風險。

圖1 (A-S)小（xiǎo）鼠屍檢

（am:腹肌；d:膈肌；di:二腹肌；i:腸道（dào）；l:肝髒；m:咬肌；o:食管；q:股四頭肌；s:皮膚；sc:脊髓；sg:唾液腺（xiàn）；sn:坐骨神經；t:舌（shé）頭）

小心剪開肋弓到下頜骨的皮膚，以減少對唾液腺和氣管造成損傷(圖1-E)。下頜骨唾（tuò）液腺附著在皮膚上(圖1-F)。

接下來，從（cóng）靠近前肢的兩側切開胸骨和肋骨，並穿過兩（liǎng）側鎖（suǒ）骨(圖1-G)。

√提示：剪刀的一（yī）個刀片應該插入胸骨上切口，另一個刀片插入肋骨和鎖骨外側，避免損傷（shāng）胸腺或心髒。注意:避免損傷胸骨，因為胸骨（gǔ）可用於評估骨髓。

使用26G3/8針頭通過氣管緩慢向肺部灌注NBF(圖1-H)。

√注意：避免多次穿孔氣管，因為這會損傷組織。提示:為了有效進行（háng）肺部灌注（zhù），可以將針頭彎曲成90度或保定小鼠頭部，以形成合適的針頭插入角度。

依次取下舌（shé）頭、下頜骨、甲狀腺、氣管（guǎn）、食道、心髒、胸腺和（hé）肺。切斷二腹肌和咬肌之間的下頜骨，並輕輕（qīng）摘取組織器官(圖1-I和1-J)。

一並取下（xià）肝髒和膈肌(圖1-K)，操作肝髒時要輕柔，因為肝髒（zāng）易碎。

通過提拉輸尿管（guǎn）並切斷背側連接（jiē），取（qǔ）下雙腎及其相伴的腎上腺（xiàn）(圖1-L)。

如（rú）果是雄性動物，取下兩個睾丸並放入Hartmann’s固定液中。解剖兩（liǎng）個附睾並平放在紙上。將精囊、前列腺和膀胱（guāng）整（zhěng）體切除（chú），平放於紙上(圖2-A至2-D)。

√提示：對於眼睛和睾丸等組織，使用（yòng）Hartmann’s固定液(改良戴維森)(Cat. H0290-500ML; Merck Life Science)可減少組織收縮和（hé）確保足夠的固定。

樣品應在室溫下固定（dìng）24-72小時，然後轉移到10% NBF中。

如果是雌性動（dòng）物，應切（qiē）開恥骨，從卵巢（cháo）到陰道口處，整（zhěng）個切除雌（cí）性生（shēng）殖道，(圖2-E至2-H)。一並取（qǔ）下膀胱，但不包括結腸，然（rán）後放置在紙上。

圖2  生殖道解剖，雄鼠(A-D)，雌鼠(E-H)。

（b:膀胱；c:結腸；e:附睾；o:卵巢；sv:精囊；t:睾丸（wán）；u:子宮角。）

剝去顱骨處的皮膚，並（bìng）在眶間切開顱骨(圖1-M)，以允許固定劑能夠滲透進大腦。雙眼應連同視神經一起切除（chú）並放入Hartmann’s固定液中。

剝離從（cóng）肩（jiān）部到尾根部的皮膚，去（qù）除皮下組織，鋪平放在紙上(圖1-N)。

從一側後肢沿股骨切取股四頭肌(圖1-O)。通過分割股二（èr）頭肌（jī）暴露坐骨神經，取出並放（fàng）在紙上(圖1-P)。

√注（zhù）意：盡量減少（shǎo）對坐（zuò）骨神（shén）經的操作（zuò），因（yīn）為它很容易損傷（shāng）。

髖關節處取下剩餘的後肢和後爪。這個樣本包含膝（xī）關（guān）節，可以脫鈣進（jìn）行組（zǔ）織學檢查。

從寰枕間隙開（kāi）始，切除兩側椎弓，並（bìng）切除和收縮背突，使脊（jǐ）髓暴露（lù）至腰椎區域(圖1-Q和1-R)。胴體放置在（zài）10%的NBF中(圖1-S)，並固定至少24小時。

√提示：脊髓暴露是操作中最具技術挑戰性的部分。我們建議使用彎曲的和/或（huò）直的彈簧剪刀和胴體定位(平放在解剖台上或彎曲（qǔ）在（zài）手上)，以減少對組（zǔ）織的（de）張力（lì）。

總（zǒng）結

這種快速完整的小鼠屍檢方法可以保存小鼠的所有組織，並最大限度地（dì）從單個標本中獲得數據。雖然必須考慮到物種（zhǒng）之間的差異，但這種方法很容易在大鼠、倉鼠、兔子等物種上複製。

不同的固定劑也可以用於滿足特定的研究需（xū）要。組織可以保存在福爾馬林中，或者在最短的固定時（shí）間（jiān）後，可以修剪、加工（gōng）、石蠟包（bāo）埋、切片並染色進行組織學分析。

注意，任何骨樣本在包埋前都必須脫鈣，以使其更容易切割和避（bì）免破碎。

參考（kǎo）資料：

1.A guide to post-mortem examination procedure in mouse models，Alexandra Rodrigues1, Lynn Beresford1, Cheryl L Scudamore etc，Laboratory Animals 2022, Vol. 56(5) 466–470