非人（rén）靈長類動物（NHP）精液樣本采集有多種目的，包（bāo）括生殖研究、物種保護、傳染病研（yán）究以及（jí）在藥物開發（fā）過程中評估生殖（zhí）安全性。在生物（wù）醫藥研究中最常見的精液采集方法是電刺（cì）激和陰莖振動刺激。電刺激是利用電流刺激NHP動（dòng）物產生射精的過程。最常用的電刺激方法是直腸探針電刺激（jī）法（RPE）和陰莖電刺激法（PEP）。據報（bào）道，直腸（cháng）探針電（diàn）刺激產生（shēng）的樣品精子濃度低於陰莖電刺激（jī）。因此，它通常被（bèi）認為不太適合於精液樣本的定量評價，而用於定性分析。陰莖電刺激最常用於收集精子進行定量分析，例如，測定精子數量和/或（huò）濃度，因為該方法采（cǎi）集到的（de）精（jīng）液量較大。而對於小型非人靈長（zhǎng）類動物（如鬆鼠猴和狨猴），陰莖振動刺激法（PVS）是比電（diàn）刺激法更優的采精方法，因為它更適合（hé）這些（xiē）動物的生理特（tè）點，同時對動物（wù）的福利影響較小。

直（zhí）腸探針（zhēn）電刺激法（RPE）

描述：這是較（jiào）早使用（yòng）的NHP采精方法。通過直接刺（cì）激盆（pén）腔器官周圍（wéi）的神經肌肉，導致盆腔器官收縮和放鬆，從而排出內（nèi）容物。該過程需要對動物（wù）進行輕度麻醉，但不需要對動物進行訓（xùn）練。操作者的（de）技術和培訓對程序的成功至關重要。

操作步驟：動物被輕度麻醉後側臥或（huò）在保定架上俯臥，使用合適大小的探針，在插入探（tàn）針前，電極需輕磨、衝洗和消毒。陰（yīn）莖（jīng）被輕（qīng）輕拉出並（bìng）清潔（可用無菌生理鹽水），然後（hòu）在探針上塗上一層薄薄的（de）水溶性潤（rùn）滑凝膠。探針電極需對準前列腺，為了確保電極與（yǔ）前列腺接觸，可將（jiāng）探頭的另一端抬（tái）起，輕輕向下按壓（yā）探（tàn）頭的尖端。通過逐漸增加電壓（yā）直到動物出（chū）現腿部伸展等反應，確定（dìng）動物的電壓設定點。達到反應點後（hòu），電壓保持不（bú）變一段（duàn）時間（最多約5秒），然（rán）後逐漸降低。這種電（diàn）壓的逐步（bù）增加、保持和降低構成了一個完整（zhěng）的刺激周期。通過多次刺激，通常三組（zǔ）刺激可以（yǐ）產生射精（jīng）。在整個刺激過程中（zhōng），陰莖的尖端需要保持在預熱的玻璃燒杯或其他收集容（róng）器上（shàng）方。

適用場景：由（yóu）於這個方法產生的樣本精子濃度較（jiào）低，因此更適合用於（yú）定（dìng）性分（fèn）析，如檢測精液中精（jīng）子的存在以確認性成熟，以及評估精子細胞的形態。

陰莖電刺激（jī）法（PEP）

描述：該方法通過刺（cì）激陰莖中的傳入神經末梢，隨（suí）後將刺激傳遞到（dào）與陰莖勃起和射精相關的傳（chuán）出神經通路。該方法（fǎ）在動物清醒狀態（tài）下采集，傳統的（de）保定方式是使用猴杆或者頸圈將動物固定在開放式的猴椅上，但近期有研究表明使用（yòng）封閉箱椅（closed box chair）是一種更優化的保定方式，可以訓練動（dòng）物直接從籠子進入封閉箱椅內，對動物福利（lì）、精液質量都有顯著改善。PEP已被證明能夠更好地刺激整個生（shēng）殖道，並且由於無需麻醉，減少了尿液汙染和精液樣本稀釋的問題（tí）。此外，與直腸探針法相關的逆行射精（精液進入膀胱）的風險在陰莖電刺激法（fǎ）中被最小化。這種非侵入性技術（shù）確（què）實需（xū）要對動物（wù）進行（háng）訓（xùn）練，並且需要控製實驗（yàn）環境（例如安（ān）靜的房間、熟（shú）悉動物的工作人員）。與直腸探針電刺激技（jì）術相比，這種方法（fǎ）可能需要更長（zhǎng）的時間來獲取樣本，但通常不會超過（guò）幾分鍾。陰莖電刺激法（fǎ）的一個潛在缺點是，有（yǒu）些動物對陰莖刺激（jī）沒（méi）有反（fǎn）應，因此無法提供精液樣（yàng）本。

操作步驟（zhòu）：將（jiāng）陰莖輕輕（qīng）拉出，用潤滑凝膠包裹的除顫器墊包裹陰莖，將電極連接到電刺激器設備上。從低電壓開始刺激（根據動物的品種和（hé）體格）不超過15秒，逐漸增加到預設的最（zuì）大值。每次刺激時，觀察動物的生（shēng）理反應和射精（jīng），整個過程通常不超過3次刺激。不同（tóng）品種的電壓刺激相（xiàng）差較大（dà），對（duì）於食蟹（xiè）猴而言，可以從10-30伏特開始，如果需要，可以以 5-10 伏特（tè）的增量逐步增加（jiā），最高至約50 伏特。在刺激（jī）過（guò）程（chéng）中將收集管放在陰莖尖（jiān）端以收集射精（jīng）的精液（yè）樣本。

適用（yòng）場（chǎng）景：該方法適用於需（xū）要（yào）較高精子數量和質（zhì）量的場景（jǐng），如體外受（shòu）精（IVF）或單精子卵胞（bāo）漿內注射（ICSI），因為其能獲得更高的精液量和精子濃（nóng）度。

陰莖振（zhèn）動刺激法（fǎ）（PVS）

描述：該方（fāng）法利用自然反射，產生正常的射精（jīng）反（fǎn）應，從而（ér）獲得自然射精。使用經（jīng）過改裝的振動設備，並配備收集容器。該方法通常將清醒的動物保定在猴椅（yǐ）上，並在（zài）黑暗的房間中進行，避免動物過於激動。

操作步驟：將陰莖輕輕從包皮鞘中（zhōng）拉出，將振動玻璃管放（fàng）在陰莖尖端並保持接觸。根（gēn）據（jù）動物對刺激的反應逐漸調整振動參數，並在刺激期間提供休息時間（jiān）。如果在15-20分鍾內未達到射精，則停止刺激。

適用場景：在小型非人靈長（zhǎng）類動物（如（rú）鬆鼠猴和狨猴）中，PVS是首選方法，因為這些動物體型較小（xiǎo），直接放置電極進行陰莖刺激較為困難，且直腸探（tàn）針法在這些小型（xíng）NHP物種中也不太適用，較小的生殖道和消化道結（jié）構可能（néng）無法讓直腸探針精準放置。

同（tóng）時，對鬆鼠猴（hóu）和狨猴的研（yán）究發現，與 RPE 采集的樣本相（xiàng）比，振動（dòng）刺（cì）激采集的精液樣本中精子和附（fù）屬腺（xiàn）的產生顯著增加（jiā）。PVS 可產生質量（liàng）更高（gāo）的射精，結合了不需要鎮靜或輕度麻（má）醉的優點，幾乎不引（yǐn）起不適，並產生無汙染的自然射精。

無論（lùn）采用何種（zhǒng）精（jīng）液采集方法，均應慎（shèn）重考慮采精動物的（de）選（xuǎn）擇。確認精子發（fā）生（通過檢測精液中的精子）是確認 NHP 性成熟的最可靠方法。在一（yī）些 NHP 種屬中，精液采集時間應考慮季節性。在此類確認之前，可通過應（yīng）用常規（guī）選擇標準（如（rú）年（nián）齡、體重和/或睾丸體積）優化動物的選擇。睾酮（tóng）由於其脈（mò）衝式/晝夜節律性波動和（hé）動物間個體差異較大，並不（bú）是（shì）可靠判定性成熟的指標。

性成熟的具（jù）體標準還取決於動物的種屬甚至地理來源。例如，來自毛裏求斯的食蟹猴已被證實從（cóng） 3-4 歲開始性成熟（shú）（精液（yè）中的精子），而來自（zì）亞洲大陸的食蟹猴需要額外一年（> 4 歲）才能達到性成熟。關於食蟹猴和恒河猴的文（wén）獻表明，小於4歲和（hé）體重（chóng）小於4kg的（de）動物不太可（kě）能性成熟。

精液采集操作的福利考量

在精液采集時，也應關注動物福利的問（wèn）題，比（bǐ）如直腸探針（zhēn）電刺激法（fǎ）（RPE）比其他采精技術更具侵入性，因為該方法需要將探針插入動物的直腸，直接刺激前列腺和盆腔器官，可能會對動（dòng）物造成一定的不適或潛在的生理損（sǔn）傷。因此在進行直腸探針電刺激前，應仔細檢（jiǎn）查直腸是否（fǒu）存在異常，如（rú）瘢痕、狹窄或痔瘡。操作（zuò）者（zhě）需要密切監控動物的（de）反（fǎn）應（yīng）和身體狀況，定期檢查（chá）是（shì）否有出血或組織損傷的跡象。一旦發現（xiàn）異常，應立即停止操（cāo）作並給予動物恢複的時間。同時，提（tí）供（gòng）必要的操作後護理和采精頻率的限製也是確保動物福利的重要措施。

而陰莖電刺激和陰莖震動刺激法雖然無創，動物也是無需麻醉在猴椅或者封閉箱椅中操作，因（yīn）此操作過程中應關注的是對動物進行（háng）馴化和保定適應，減少動物的應激。同時在電刺激時應嚴格控（kòng）製給予刺激的電流，以及電刺激的次數。

通過（guò）上文描述，可以看出選擇合（hé）適的動物以及合適的方法才能夠采集到合適的樣本，同時應關注動（dòng）物的福利問題，最大程度減（jiǎn）少對動物的不利影響。